AUTHOR:MEKUE MOUAFO Chapdeleine Linda
CO-SUPERVISOR:
Dr. NKENFOU Céline
SUPERVISOR:
Pr. KUIATE Jules-Roger
OBJECTIF: determination of
the distribution of the CCR2-64I mutation in a sample population from Dschang
and analyse the association of tis host gene polymorphism with HIV serostatus.
RESUME
VIH/SIDA
est une pandémie qui sévie beaucoup dans les pays en voie de développement. Le
Cameroun, en Afrique centrale regorge l’une des plus grandes épidémies dans
cette sous-région avec une prévalence estimée à 5.3% en 2009 (UNAIDS, 2009),
5.1% en 2010 and 4.3% en 2011 (EDS-MICS, 2011). Les chimiokines sont des
cytokines qui peuvent bloquer la réplication du VIH aux cellules cibles, mais
quand ils sont mutés peuvent inhiber la pathogénicité du VIH ou retarder la
progression de l’infection au SIDA, ainsi peuvent êtres des cibles pour la mise
au point des vaccins. CCR2 est l’un des récepteurs de chimiokines, présent à la
surface des macrophages, cellules dendritiques et cellules Th- mémoire, actif
dans la réponse immunitaire. Il agit comme récepteur de la MPC-1(CC chimiokine)
et comme co-récepteur pour l’entrée du VIH dans les cellules cibles. Une
substitution de la guanine par adénine à la position 190 cause une substitution
de la valine par l’isoleucine à la position 64 caractérisant la mutation
CCR2-64I. Cette mutation a été identifiée comme facteur important dans le
retardement de la progression de l’infection au VIH. Mais il y’a manque
d’information sur la distribution de cette mutation dans les populations
africaines et au Cameroun en particulier. Ainsi le but de notre étude était de
déterminer la prévalence du polymorphisme CCR2-64I et de voir si ce
polymorphisme était lié au statut VIH sérologique au sein d’une population de
Dschang (Cameroun).
Après extraction de l’ADN à
l’aide du « QIamp DNA Mini kit », un fragment de 380bp du gène
CCR2 a été amplifié par PCR, puis le produit de PCR digéré par l’enzyme de
restriction à activité endonucleasiqueFokI,
et le génotype de chaque échantillon déterminé par migration
électrophoretique sur gel d’agarose. La présence de cette mutation a été
identifiée sur 27% de la population étudiée, avec une fréquence d’allèle de
0.15. La prévalence des hétérozygotes CCR2-64I/CCR2 était de 24.3%, et celle
des homozygotes mutant CCR2-64I/ CCR2-64I était de 2.9%. La méthodologie de
caractérisation des gènes de l’hôte utilisant le sang frais peut utiliser les
DBS comme alternative d’échantillonnage dans les endroits reculés ou chez les
enfants.
Nous
avons découvert que de génération en génération la distribution de ce dernier
est la même et donc est en équilibre. Ainsi nous pouvons dire qu’avec le temps
il n’y a pas eu de facteurs externes qui ont perturbé la fréquence de cette
mutation. Aussi nous avons trouvé que la distribution de cet allèle n’était pas
liée au statut sérologique VIH.
Mots clé :
mutation CCR2-64I, co-récepteur du VIH, population du Cameroun, polymorphisms.
ABSTRACT
HIV/AIDS
is a pandemic disease that strikes developing nations. Cameroon, in central
Africa, has one of the largest HIV epidemics in this sub-region with an adult
national prevalence estimated at 5.3% in 2009 (UNAIDS, 2009), 5.1% in 2010 and
4.3% in 2011 (EDS-MICS, 2011). Chemokines are cytokines that can block HIV
replication and their receptors play an important role in fusion of HIV to
target cells, but when mutated can inhibit the pathogenicity of HIV or delayed
the progression of HIV infection to AIDS, hence being a start point in vaccine
trials. CC Chemokine receptor type 2 (CCR2)is one of the chemokine receptor
family, active in the immune response. It is found on the surface of
macrophages, T-memory cells and dendritic cells. CCR2 acts as a receptor for
MCP-1 (CC chemokine) and as a co-receptor for HIV-1 cell-target entry. A
guanine to alanine substitution at position 190 characterizes the CCR2-64I
mutation, causing valine to isoleucine substitution in codon 64, given a
polymorphism among individuals. This mutation has been identified as an
important factor for delaying progression to AIDS. But limited information is available on the distribution among African
populations (and particularly Cameroon) of this host genetic polymorphisms
conferring resistance to HIV-1 infection or slowing HIV disease progression. This is why the aim of our study was to determine the
distribution of the CCR2-64I mutation in a sample population from Dschang
(Cameroon) and to see if this can explain the outcome of HIV/AIDS.
The
DNA extraction was done using the QIamp DNA Mini kit, after a portion of 380bp
of the CCR2 gene was amplified and the genotyping done by RFLP using the
restriction endonuclease enzyme Fok I, the
product analysed by migration on an agarose gel electrophoresis. The presence of the AIDS-related polymorphisms
CCR2-64I mutant allele was identified in 27% of the population studied with an
allele frequency of 0.15. The prevalence was
24.3%, for CCR2-64I heterozygotes, and 2.9% for the CCR2-64I homozygotes
mutant. We have also concluded that the methodology of characterization of host
gene from fresh blood sample can be also applied to DBS as sampling
alternative, if the study is carried out in remote areas or on infants.
This study is the second one in Cameroon that intends
to give the frequency distribution of the CC2-64I in a population of Cameroon.
We have found that from generation to generation there are no external factors
that disturb the genetic distribution of this polymorphism. The distribution of
this allele was not link to the HIV status.
Key words: CCR2-64I mutation, population of Cameroon, HIV
co-receptor, polymorphism
DATE OF THE DEFENCE: 29 may 2012
JURY:
-
President : Pr. PAMO Etienne
-
Reporter: Pr. KUIATE Jules-Roger
Dr. Nkenfou Céline
-
Member:
Dr. Tume Christopher
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